本发明公开了一种制备甲肝灭活疫苗的方法，向人胚肺二倍体细胞2BS株接种0.01‑0.04MOI甲肝病毒，将人胚肺二倍体细胞2BS株与甲肝病毒置于常温下进行混合吸附50‑100min，在步骤3完成后抽出培养液进行更换再次混合吸附，在多次混合吸附后投入至离心机内进行离心取沉淀，向沉淀中加入细胞裂解液投入至混合机内进行混合50‑100min，再取沉淀加入聚乙二醇再次进行混合50‑100min，取出沉淀后加入磷酸盐缓冲液悬浮制备甲肝病毒原液，对甲肝病毒原液进行超滤膜超滤，经氢氧化铝佐剂吸附，制备得到甲肝灭活疫苗，采用此种制备方法，可以实现多次的混合吸附，使其更好的可以提取和制备甲肝病毒原液，从而达到高效提取和高质量的甲肝灭活疫苗。