本发明公开了一种单分散二氧化硅胶乳微球的制备方法，包括以下步骤：S1合成单分散SiO₂微球种子：在醇、水和氨水溶剂体系中，加入四乙氧基硅烷‑醇溶液反应得到单分散SiO₂微球种子；S2制备单分散SiO₂微球：将所述步骤S1中得到的单分散SiO₂微球种子与氨水和醇配成SiO₂种子液，再加入氨水‑醇溶液和四乙氧基硅烷醇溶液反应得到单分散SiO₂微球悬浮液；S3精处理：将所述步骤S2得到的单分散SiO₂微球悬浮液经过离心、洗涤数次得到单分散SiO₂微球。可获得高圆度、窄分布、且粒径可控的单分散SiO₂微球，通过反应溶剂的选择及反应温度的控制，得到的SiO₂微球分布更均匀，粒径分布偏差不大于2％。