本发明公开了一种非酒精性脂肪性肝病肝脂肪变性模型的构建方法及其应用，所述构建方法包含以下步骤：将原代肝细胞贴附培养；将肝星状细胞或人皮肤成纤维细胞消化后离心并弃去上清；将肝星状细胞或人皮肤成纤维细胞接种至肝细胞中诱导培养。在共培养诱导体系下，可以使肝细胞脂滴形成并逐渐增多融合形成大脂滴呈现脂肪沉积。肝细胞脂肪沉积的形成可作为肝脂肪变性模型。本发明构建的模型诱导周期短，成本更加低廉且更接近于临床疾病特征；相比于单纯原代肝细胞培养及3D微球培养模式，本发明方法肝细胞体外培养持续时间较长，模型稳定、成型率高、重复性好且无需生物材料的协助。