本发明属于电化学传感器领域，具体涉及一种电化学发光免疫传感器及其制备和应用。公开了基于以MoS₂@GO基底和Ru‑MOF发光探针的超灵敏检测五氟尿嘧啶的竞争型电化学发光免疫分析方法及在人血清样品中的检测应用。本发明制备了Ru‑MOF纳米片和MoS₂@GO纳米片，分别作为发光探针及修饰电极基底，开发了超灵敏检测五氟尿嘧啶的电化学发光免疫传感方法。本发明利用合作开发的五氟尿嘧啶单克隆抗体与抗原之间的特异性免疫反应来定量检测五氟尿嘧啶，提高了对目标检测物的选择性，该免疫传感器使用仪器设备简单，操作简便，检测效率高，样品处理简单，且具有高的灵敏度和宽的线性范围，便于普及且成本较低，具有高的实用价值。