本发明公开了一种基于二标记的电化学免疫传感器的制备方法，其技术要点是：包括以下步骤：S1、清洗设备与准备：包括制备王水溶液、制备铬酸溶液、玻璃容器清洗、离心管和移液枪头的清洗、微量注射器的清洗、金电极的清洗；S2、溶液准备：磷酸缓冲溶液的制备、L‑半胱氨酸溶液的制备、戊二醛溶液的制备、1％小牛血清溶液的制备、氧化石墨烯溶液的配制、2％聚二烯二甲基氯化铵溶液配制；S3、制备金溶胶：仪器清洗准备、配制氯金酸溶液、配制柠檬酸钠溶液；S4、标记及电检测。基于二标记的电化学免疫传感器的制备方法提供了一种疾病诊断工具，对公共卫生领域发展是有长远现实意义。