本发明公开了一种流式细胞术分选牙鲆CD4⁺T淋巴细胞的方法，包括如下步骤：取牙鲆头肾组织，经Percoll密度梯度离心法，获得头肾淋巴细胞；在头肾淋巴细胞中加入抗牙鲆CD4‑1和CD4‑2分子的单克隆抗体和FITC标记的羊抗鼠IgG孵育；以磷酸盐缓冲液为流式细胞仪的鞘液，用胎牛血清润洗1.5mL无酶离心管，将其置于流式细胞仪分选仓中的流式收集管上；孵育抗体后的淋巴细胞经流式细胞仪分析，设置CD4⁺T淋巴细胞门进行细胞分选；荧光显微镜下观察分选细胞的纯度，并通过PI和台盼蓝染色测定细胞的活性。本发明通过使用适合于鱼类淋巴细胞的磷酸盐缓冲液和收集分选细胞的装置，创造性地建立了流式细胞术分离海水鱼类CD4⁺T淋巴细胞的方法，具有重要的科学意义和应用价值。