本实用新型涉及细胞培养技术领域，特别是涉及一种干细胞恒温培养设备，包括培养箱、凹槽盒及密封盖，凹槽盒位于培养箱内且共设有三个，凹槽盒内壁四周均固定连接有两个呈上下分布的复位弹簧，凹槽盒内围四周分别通过上下相邻两个复位弹簧固定连接有限位夹板，凹槽盒内且位于限位夹板内侧放置有培养皿，密封盖盖于培养箱上方，密封盖内部且位于每个培养皿上方均开有观察口，每个观察口内均固定连接有放大镜；通过限位夹板将培养皿四周进行夹紧限位，防止培养皿在培养箱内产生倾倒，保证了培养皿在培养箱内安装培养时的稳定性，而且通过观察口及放大镜便于观察到相应的培养皿，从而利于监测培养皿内干细胞的培养状态，减少培养失误。