本申请实施例提供一种生物传感器，属于电化学分析技术领域，包括基板；设置在基板上的电源电极和多个工作电极；基板具有反应区域，反应区域包括第一区域和多个相互独立的第二区域，每个第二区域均与第一区域连通，电源电极的信号端位于第一区域内，多个工作电极的信号端分别位于不同的第二区域内；亲水层，亲水层设置在电源电极和多个工作电极上，且亲水层覆盖反应区域；疏水层，疏水层设置在基板上，且疏水层将亲水层围绕在内。通过本申请实施例提供的一种生物传感器及其制造方法，可以减少出现工作电极之间互相干扰的情况，提高检测结果的准确性。