本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定新型冠状病毒Lambda变异株的qRT‑PCR方法。本方法为提升检测灵敏度和特异性，引入TaqMan探针；为降低成本，将2对引物改为1对半引物，即：2条上游引物分别靶向突变位点和原始未变异位点，1条下游引物为2条上游引物共用。为增强变异检测的灵敏度，在上游突变引物变异位点5’方向第3个位点引入突变，通过降低反应体系中变异引物与未变异病毒核酸和未变异引物与变异病毒核酸的匹配度，造成反应体系中变异引物扩增变异病毒核酸的扩增曲线早于扩增非变异核酸的扩增曲线，同理，非变异引物扩增非变异核酸的扩增曲线早于扩增变异核酸的扩增曲线。