本发明涉及一种具有抑制胰脂肪酶活性的N⁶‑乙酸乙酯基‑5’‑乙酯基‑β‑核糖腺苷及制备方法，属于生物制品的提取制备技术领域。N⁶‑乙酸乙酯基‑5’‑乙酯基‑β‑核糖腺苷为黄色油状物质，经一维和二维核磁共振、精确质谱鉴定分别得到N⁶‑乙酸乙酯基‑5’‑乙酯基‑β‑核糖腺苷结构式。本发明通过培养蝉花真菌，然后提取分离得到所需的化合物。本发明制备的N⁶‑乙酸乙酯基‑5’‑乙酯基‑β‑核糖腺苷可用于制备胰脂肪酶抑制剂，对治疗肥胖具有潜力作用，同时还可能对糖尿病有潜在作用。本发明的制备方法采取微生物发酵生产，环境友好，不受自然环境和资源影响，易实现工业化、自动化、连续化生产。