本发明涉及一种小鼠脂肪干细胞外泌体制备方法，包括以下步骤：取对数生长的第3至6代的小鼠脂肪干细胞用含10％FBS的DMEM培养液培养，直到细胞密度达到70％‑80％，换用含10％无外泌体FBS的DMEM培养液继续培养45‑50小时，收集上清培养液，离心除去细胞和细胞碎片，再用100kDa分子量的超滤管于1500‑2500g下离心30min浓缩，将外泌体快速提取试剂加入到浓缩液提取，离心，收集小鼠脂肪干细胞外泌体。本发明的方法显著提高了小鼠脂肪干细胞外泌体的产量和提取效率，且避免了超速离心等外泌体提取方法费时费力、产量低及可能损坏外泌体结构并影响其生物活性的缺陷，所制备的脂肪干细胞外泌体能显著促进小鼠毛发生长。