本发明公开了一种具有逐层诱导性能的韧带再生支架及其制备方法。本发明的韧带再生支架具有多层复合结构，由梯度降解的微米纤维增强层和取向排列的纳米纤维诱导层交叠复合而成；其中，微米纤维增强层由具有不同降解周期的纱线通过多维多重纺织成型织造，纳米纤维诱导层由高分子材料和生物活性成分通过静电纺丝制备而成。本发明的制备方法包括：制备微米纤维增强层，制备纳米纤维诱导层，然后逐层复合，制得一种具有逐层诱导性能的韧带再生支架。本发明基于对梯度降解结构的调控，在保证初期力学强度的同时实现微米纤维增强层的梯度降解，逐层暴露出纳米纤维诱导层，以精准调控支架内部组织的浸润与重塑，可用于韧带/肌腱再生重建治疗。