本发明公开了一种高识别的真菌荧光染色液，其特征在于，由如下按质量百分比计的各组分制成：荧光增白剂0.3‑1.5％、背景染料0.05‑0.25％、渗透剂3‑13％、抗荧光衰退剂1.5‑4.5％、表面活性剂0.01‑0.05％、稳定剂14‑32％、樟脑磺酸钠0.1‑0.4％、茶多酚0.3‑0.6％、烟酰胺腺嘌呤双核苷酸0.1‑0.3％、甜菜碱0.01‑0.03％、水溶性环糊精聚合物0.01‑0.03％、N,N‑二(2‑羟乙基)‑2‑氨基乙磺酸钠0.01‑0.04％，余量为去离子水。本发明还公开了一种所述高识别的真菌荧光染色液的制备方法。本发明公开的高识别的真菌荧光染色液识别性和灵敏度高，对真菌的染色效果佳，长期存放稳定性好，使用方便，适用性足，染色结果判读的准确率和效率优异。