本发明公开了一种高压脉冲等离子消毒灭菌机，其包括包括灭菌腔、管道、等离子发生器、高压电源及脉冲发生器；管道与灭菌腔的空气进口相连通；等离子发生器设置于管道内；高压电源的直流高压经脉冲发生器转换成高压脉冲，脉冲发生器将高压脉冲传导至等离子发生器，使等离子发生器产生等离子体；空气进入管道后，气流将产生的等离子体带到灭菌腔，对灭菌腔内的物件进行消杀；还公开了一种高压脉冲等离子消毒灭菌机及消毒灭菌方法。本发明中消杀方式为空气消杀，并在常温下进行，不仅不会对被消杀物件造成损坏，不会有任何残留，而且消杀的速度快、耗时短，任何空气能到达的地方都可以消杀，不存在消杀死角，可广泛应用于各种消杀场景。