本发明提供一种绿色、可规模化的丝素纳米纤维制备方法，包括以下步骤：(1)将脱胶后的丝素纤维剪碎后放入强碱溶液中，机械搅拌状态下松解处理，得丝素纤维浆液；(2)将上述丝素纤维浆液先后经高速破碎、离心洗涤、超声破碎，后过滤得丝素纳米纤维分散液。本发明的制备方法，以强碱溶液处理脱胶后的丝素纤维，并辅以搅拌对丝素纤维进行松解处理，能够有效破坏丝素纤维之间的作用力，降低破碎难度。另外，采用高速破碎和超声破碎相结合的方式对丝素纤维进行破碎处理，提高了产品尺寸的均匀性、分散稳定性和产率，降低了单一机械破碎的难度，提高生产效率。