一种高效表达及纯化Cas9蛋白的方法和应用
实质审查的生效
摘要
本发明公开一种高效表达及纯化Cas9蛋白的方法和应用。本发明主要包括Cas9表达载体的构建，大肠杆菌的转化，Cas9蛋白的诱导表达，Cas9蛋白的纯化，以及体内体外的应用。使用GB1作为促溶标签，可增加SpCas9的稳定性及溶解性，初步提高SpCas9的表达量，且GB1不影响SpCas9的功能，后续不需去除，简便可行。再通过使用10×His标记，有助于融合蛋白与Ni‑NTA树脂的高亲和力，并有助于高盐洗去除污染的核酸，提高纯化效果。使用串联T7启动子，明显提高SpCas9的表达量。通过体内外应用，证明了所纯化得到的SpCas9‑GB1蛋白正确折叠，具有切割DNA的能力，且可入核进行基因编辑。
基本信息
专利标题 ：
一种高效表达及纯化Cas9蛋白的方法和应用
专利标题（英）：
暂无
公开（公告）号 ：
CN114410608A
申请号 ：
CN202210054940.3
公开（公告）日 ：
2022-04-29
申请日 ：
2022-01-18
授权号 ：
暂无
授权日 ：
暂无
发明人 ：
潘力廖清王斌
申请人 ：
华南理工大学
申请人地址 ：
广东省广州市天河区五山路381号
代理机构 ：
广州市华学知识产权代理有限公司
代理人 ：
崔红丽
优先权 ：
CN202210054940.3
主分类号 ：
C12N9/22
IPC分类号 ：
C12N9/22 C12N15/70 C07K19/00 C12N15/87 C12R1/19 C12R1/685
IPC结构图谱
C
C部——化学；冶金
C12
生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程
C12N
微生物或酶；其组合物；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基。
C12N9/00
酶，如连接酶；酶原；其组合物；制备、活化、抑制、分离或纯化酶的方法
C12N9/14
水解酶
C12N9/16
作用在酯键上
C12N9/22
核糖核酸酶
法律状态
2022-05-20 ：
实质审查的生效
IPC(主分类) : C12N 9/22
申请日 : 20220118
申请日 : 20220118
2022-04-29 ：
公开
注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
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