本发明公开了葡萄糖生物传感膜、葡萄糖氧化酶及其制备方法，重组葡萄糖氧化酶的制备方法包括如下步骤：A）、葡萄糖氧化酶的脱辅基化；B）、金属络合物与黑磷纳米片和葡萄糖氧化酶的辅基偶联；C）、葡萄糖氧化酶的重组。本发明将葡萄糖氧化酶重组到含有电子传递接力点的黑磷纳米片上，成功地研制出了具有极低氧化还原电位的葡萄糖生物传感膜；由该葡萄糖生物传感膜制备的葡萄糖生物传感器，不仅保持了对葡萄糖的催化氧化性能，而且实现了在非常低的电位（‑100~0毫伏）下对葡萄糖进行监测，显著地改善了葡萄糖生物传感器的灵敏度、准确性、稳定性和专一性。