不同级别脑胶质瘤肠道菌群标志物及其应用。具体应用步骤为：1)提供受试者的新鲜粪便样本；2)对样本进行粪便DNA的提取，肠道菌群16S rRNA基因文库的构建，文库的高通量测序；3)采用肠道微生物的特异性识别试剂进行PCR扩增并测序获得测序数据；4)测序数据的分析方法包括对文库测序后得到的数据进行拼接，过滤除去引物和嵌合体序列，进行OTU聚类和物种注释，得到肠道菌群样本中的物种多样性和物种丰度；5)对步骤4)中得到的OTU采用随机森林算法进行分析；6)预测所述受试者是否为不同级别脑胶质瘤患者。本发明通过检测特定菌群的变化，可以实现脑胶质瘤的辅助诊断，使用本发明的微生物标志物进行诊断，操作简单、特异性高、敏感性强。