本发明属于生物制品检测领域，具体涉及针对逆转录病毒稳产细胞PG13的宿主蛋白残留检测方法的建立及其应用。本发明提供了检测PG13稳产株所产的逆转录病毒或/和由所述逆转录病毒制备的CAR‑T细胞中残留宿主蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括抗PG13‑HCP抗体、标记物偶联抗体和抗原标准品，所述抗PG13‑HCP抗体是以PG13‑HCP抗原为免疫原得到的多克隆抗体或单克隆抗体，所述标记物偶联抗体是用标记物偶联所述抗PG13‑HCP抗体得到的化合物，所述抗原标准品为所述PG13‑HCP抗原。结果显示抗PG13‑HCP特异性多克隆抗体可较全面地覆盖PG13‑HCP抗原蛋白，并且不会与人来源的逆转录病毒蛋白成分产生交叉反应，灵敏度可达15.6ng/mL，因此该方法实现了高灵敏度和特异性的PG13‑HCP残留检测，使逆转录病毒生产符合GMP和临床应用的要求。