本发明公开了一种高致密细菌纤维素制备方法，以多巴胺含量为1‑4mg/mL的培养基培养木醋杆菌，一步合成孔隙率低至67‑73％的细菌纤维素。首先按常规方法配制培养基，高温高压灭菌后添加多巴胺；接着将木醋杆菌接种到含多巴胺的培养基进行静态培养，借助多巴胺加速木醋杆菌分泌，促进细菌纤维素纳米纤维形成；随后以去离子水清洗残留培养基，再以热碱溶液去除木醋杆菌并使掺杂于细菌纤维素纳米纤维的多巴胺聚合成聚多巴胺；最后以去离子水清洗至中性，冷冻干燥处理后即为所得。掺杂的聚多巴胺不仅提高细菌纤维素的生物相容性，而且其丰富的官能团可作为固定其他活性分子的位点。本发明提供的高致密细菌纤维素有望应用于血管补片、人工血管和覆膜支架等方面。