本发明公开了一种快速培养硫自养反硝化细菌的发酵方法，涉及环保生物技术领域，采用一级种子培养基、二级发酵培养基对菌种的连续接种培养和补料培养基的补料发酵，实现硫自养反硝化细菌的快速制备。本发明精简了培养流程，同时降低了培养难度。目的在于解决该菌培养过程中遇到的费时、工艺复杂等问题,可实现硫自养反硝化细菌的高密度培养,培养方法简单，选择性强，不易染杂菌，成本低，可实现工业化生产。