本发明涉及一种胆固醇氨基衍生物‑蔗糖酯型阳离子脂质体/基因复合物及其制备方法，该复合物由含有胆固醇氨基衍生物‑蔗糖酯型阳离子脂质体和基因通过静电作用组成。制备方法如下，步骤一：阳离子类脂的处理；步骤二：胆固醇氨基衍生物‑蔗糖酯型阳离子脂质体的制备；步骤三：吹膜和干燥；步骤四：水化；步骤五：基因复合物制备。带正电的阳离子脂质体与带负电的/基因通过静电作用结合形成基因复合物，该复合物通过内吞作用进入细胞形成内涵体，通过质子缓冲作用突破内涵体并释放基因分子，最后基因分子摄入细胞核进行转录表达。本发明采用水化薄膜法制备产物,方法简单方便，稳定性好，毒性低，转染效率高，为基因治疗提供了新思路。