本发明公开了一种抗氧化荷叶提取物的指纹图谱构建方法及应用。本发明采用高效液相色谱方法建立了荷叶提取物的对照指纹图谱，色谱条件：采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱；流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸水溶液，采用梯度洗脱程序，检测波长360nm。本发明选择其中已知成分金丝桃苷作为参照物，对10批荷叶提取物高效液相色谱中5个共有特征峰进行了相对保留时间的计算，并采用DPPH自由基清除试验验证了该荷叶提取物的显著抗氧化活性。本发明的方法简便、快捷、精密度高、灵敏度理想，荷叶提取物的抗氧化活性通过其对照指纹图谱控制得到了有效保障，为荷叶提取物系列产品的开发奠定了基础。