本发明涉及一种用于缓解视疲劳的灵芝糖类提取物的制备方法，其将粉碎过的灵芝干燥子实体与含发酵菌和生物酶的水溶液混合，经发酵、酶解；加水提取，过滤，脱色，浓缩，醇沉，再次过滤，获得沉淀和滤液；滤液回收乙醇，浓缩液注入大孔吸附树脂中，收集水洗脱部分，浓缩，冷冻干燥，得灵芝糖类提取物Ⅰ；沉淀加水溶解后，超滤，收集截留液，减压浓缩，冷冻干燥，得灵芝糖类提取物Ⅱ；所述灵芝糖类提取物Ⅱ和/或灵芝糖类提取物Ⅰ即为灵芝糖类提取物；其能显著清除自由基、保护视网膜上皮细胞、降低氧化应激压力等，制成滴眼液、眼用凝胶或洗眼液等，具有温和无刺激、无毒副作用、有效缓解视疲劳等优点。