本发明公开了使用蘑菇壳聚糖纤维支架生产细胞培养肉的方法，包括将蘑菇壳聚糖配制成纺丝液并纺丝，纺丝通过固定液固定，之后后处理得到蘑菇壳聚糖纤维支架，之后将细胞接种于灭菌后的蘑菇壳聚糖纤维支架上，培养得到细胞培养肉。本发明一些实例的方法，制备得到的蘑菇壳聚糖纤维支架具有良好的生物相容性，多种细胞均可有效附着，利于生产细胞培养肉；所使用的材料全部可食用，具有良好的安全性；所使用的材料全部为非动物源材料，可以摆脱对传统动物饲养的依赖。