本发明公开了一种检测酪氨酸酶荧光探针及其制备方法和应用，属于化学分析检测技术领域。该检测酪氨酸酶荧光探针具有以下结构式：本发明制备的荧光探针具有荧光背景低、化学稳定性好、水溶性好、选择性高、斯托克斯位移大、抗干扰能力强、灵敏度高、检测效果好等优点；本发明制备的荧光探针本身处于荧光淬灭状态，与酪氨酸酶结合识别后，表现出强烈的荧光，荧光增强约178倍；本发明制备的荧光探针不仅能用于体外酪氨酸酶活性的检测，还能应用于酪氨酸酶抑制剂的筛选，对治疗与酪氨酸酶相关疾病具有重要意义；本发明制备的荧光探针可用于细胞和斑马鱼中内源性酪氨酸酶的检测和成像，成功用于细胞水平以及生物水平的酪氨酸酶的检测和成像。