本发明提供了一种基于KASP技术用于水稻耐高温基因分型的引物组、检测试剂盒及其应用，属于分子生物学及作物遗传育种技术领域。基于KASP技术用于水稻耐高温基因分型的引物组包括扩增OsTT1的引物组、扩增SLG1的引物组和扩增SUS3的引物组。本发明对OsTT1、SLG1和SUS3中SNP位点设计引物，通过筛选，去除了引物组合出现的错配、发夹结构、引物二聚体等情况，获得的3组引物组可有效区分等位变异位点，可用于增强水稻耐高温能力。采用所述引物组对16份水稻材料进行3个耐高温基因有利等位变异分析，结果能够明显区分不同水稻种质3个耐高温基因的基因型的检测，为耐高温水稻辅助育种提供了新思路。