本发明公开了一种检测痕量雌激素、17‑羟孕烯醇酮、醛固酮、硫酸脱氢表雄酮的前处理方法及检测方法，前处理方法包括以下步骤：1)将待测样品和内标溶液混匀；2)加入磁珠，混匀，通过磁力架吸附磁珠，移除溶液；3)加入甲醇水，混匀，通过磁力架吸附磁珠，移除甲醇水溶液；4)加入甲醇水，混匀，通过磁力架吸附磁珠，移除甲醇水溶液；5)加入洗脱液，混匀，通过磁力架吸附磁珠，移取全部洗脱液，加入氨水稀释，混匀，离心。本发明能快速实现待测物分离，便于实现自动化，提高检测通量；避免了使用大量挥发性溶剂，环境友好；采用磁珠作为吸附剂分离目标物，可以增加接触面积，提高交换速率，提升富集效果，保证检测结果的平行性和均一性。