本发明公开了无血清培养基间充质干细胞的培养方法及干细胞接种装置，涉及间充质干细胞培养技术领域；为了提升接种时的稀释效果；该装置包括：底座，所述底座上安装有支撑机构；试管，试管可拆卸的安装于支撑机构上，试管关于支撑机构呈圆周分布设置；该方法包括如下步骤：通过使用I型胶原酶和DNase I处理间充质干细胞组织；分离得到干细胞的单细胞悬液。本发明通过设置插管、试管等结构，能够将菌液滴入到装有稀释液的试管内时，通过挤压气囊，向试管内压入气体，达到曝气的效果，进而促进菌液与稀释液混合，从而提升稀释效果；由于设置了第一单向阀、第二单向阀等结构，有效避免了菌液被吸入插管内的情况，提升了可靠性。