本申请涉及免疫层析检测技术领域领域，具体而言，涉及一种荧光免疫检测高血压多联试剂卡、制备方法及其应用。一种荧光免疫检测高血压多联试剂卡，包括：外壳和多个检测不同指标的检测卡，多个检测卡分隔设置在外壳内；检测卡包括顺次搭接在底板上的滤血垫、喷金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。本申请还提供一种荧光免疫检测高血压多联试剂卡的制备方法，包括荧光微球复合物溶液的制备、喷金垫制备、划膜、滤血垫制备和检测卡组装。该荧光免疫检测高血压多联试剂卡可一次性检测多种高血压指标，其操作简单，携带方便，可在15min内得到高血压相关指标的定量浓度，为高血压诊断提供支持。