本发明属于细胞分离、培养技术领域，公开了一种制备经血源性间充质干细胞的方法。该方法通过将经血样品过10～30目筛，除去血块、大块组织，避免后续离心时影响离心效果；本发明在传统方法即收集白膜层的基础上，增加收集血细胞层的步骤，同一样本可同时用传统方法和收集血细胞层的方法对密度梯度离心的不同分离层样本进行目的细胞的回收，可以在原有传统方法的基础上提高原代目的细胞的回收率，有利于后期进行生产和建库；且与传统的分离方法相比，通过本发明方法制备的细胞在后期培养过程中细胞的增殖能力强于传统分离方法的，对于后期在保证细胞质量的前提下，缩短体外培养时间，以实现早期代次的细胞作为制剂产品有着积极地作用。