本发明涉及羊肚菌种植技术领域，且公开了一种高存活率的羊肚菌菌种的培育方法，所述高存活率的羊肚菌菌种的培育方法包括以下步骤：S1、羊肚菌菌种拌种剂，按照重量份计算，包括尿素20‑30份、磷酸二氢钾10‑20份、硫酸镁10‑20份、硼砂1‑3份、硫酸锌1‑3份、稀土微肥0.5‑3份和硫胺素0.5‑3份，S2、使用时将羊肚菌菌种拌种剂按照0.002％～0.02％的重量比拌入羊肚菌栽培种播种即可，S3、不加盖遮阳网经过阳光暴晒可直接提升土壤地温增加积温，使羊肚菌菌丝能够充分生长。该高存活率的羊肚菌菌种的培育方法，通过羊肚菌菌种拌种剂能够快速恢复羊肚菌菌种生长活力，促进菌丝萌发，增强菌丝从土壤和营养袋中吸收营养的能力，加快菌丝健康生长，从而达到增产和高存活率的目的。