本发明属基因工程领域，涉及含虫光素酶重组基因的新型菌株及虫光素酶的生产方法：将取自Ｐ^SV-luc20虫光素酶基团整合到带信号肽的表达质粒P^{IN-III-compA3},构建成新型重组ＤＮＡ并将其转化大肠杆菌ＪＭ１０１，获得能产生有催化活性的虫光素酶基因的新型菌株Escherichia coli JM101 Lus-J-1,保藏号CGMCC NO.0199,利用该菌株经发酵培养法可生产虫光素酶，此法具有生产周期短，培养基成分简单，可诱导高产，酶蛋白能分泌到细胞周质区，且生产成本低，易制备、纯化等优点。