一种具有底物选择性记忆的水解酶及其制备方法，解决现有技术中生物印迹酶只能在有机溶剂中使用，而不能在水溶液中进行催化的问题。本发明将生物印迹技术与酶固定技术结合起来，在α－胰凝乳蛋白酶中构建出可识别甲基磷酸－p－硝基苯酯的活性部位，并可使乙酸－p－硝基苯酯水解反应速率提高32倍。方法是将溶有甲基磷酸－p－硝基苯酯的α－胰凝乳蛋白酶冷冻，并转移到有机溶剂中沉淀。将被印迹的酶包埋在交联的聚丙烯酸中，由此来催化乙酸－p－硝基苯酯的水解反应。酶在水溶液中仍保持印迹的分子记忆。