本发明公开了一种检测多拉菌素的方法及其专用酶联免疫试剂盒。该检测多拉菌素的酶联免疫试剂盒，包括多拉菌素特异性抗体及包被原和酶标记物；所述包被原为多拉菌素半抗原与载体蛋白的偶联物或多拉菌素抗抗体；所述酶标记物为酶标多拉菌素抗抗体或酶标多拉菌素半抗原；当所述包被原为多拉菌素半抗原与载体蛋白的偶联物时，所述酶标记物为酶标多拉菌素抗抗体；当所述包被原为多拉菌素抗抗体时，所述酶标记物为酶标多拉菌素半抗原；所述多拉菌素半抗原是将多拉菌素的5位羟基用琥珀酰酐酰化，从而在分子中引入羧基，合成多拉菌素半抗原。本发明的方法操作简便、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本筛查的检测动物组织、血清、牛奶及饲料中多拉菌素药物残留量。