本发明涉及一种以非洲马瘟病毒基因片段为靶目标设计合成的生物制剂，尤其是能够对非洲马瘟病毒进行检测的试剂以及这种试剂的制备方法和应用。本发明系选择非洲马瘟病毒特异而各型病毒间比较保守的VP7基因片段为靶目标，根据VP7基因的特点和引物、探针设计的原则，设计合成引物和探针。将设计的多对引物和探针进行最佳配对筛选实验，并经过大量的反应条件优选、对比试验和验证试验，得到最适合的引物和探针。本发明所述的非洲马瘟病毒荧光定量RT－PCR检测试剂包含一对特异性引物和一条特异性荧光探针，扩增目标片段长度为69bp。