一种在细胞系中条件性敲除必需基因的方法
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摘要
本发明属于基因工程领域，具体为一种在细胞系中条件性敲除必需基因的方法。本发明首先构建双质粒系统：敲除质粒(KO质粒)编码用于敲除必需基因的Cas9和sgRNA，营救质粒(Rescue质粒)编码由Tet‑off系统调控的外源补偿基因，然后将两个质粒同时转入细胞后用药筛若干天，分选单克隆，通过测序鉴定，获得必需基因纯合敲除细胞系。本发明中可以通过加Doxcyclin关闭外源基因表达，以研究必需基因的功能。另外，本发明中Rescue质粒可以被另外一个含有不同抗性基因的Rescue2质粒替换，Rescue2质粒上编码必需基因的突变体，用以研究必需基因突变体的功能。本方法操作简单，实验周期短。
基本信息
专利标题 ：
一种在细胞系中条件性敲除必需基因的方法
专利标题（英）：
暂无
公开（公告）号 ：
CN109777830A
申请号 ：
CN201910022784.0
公开（公告）日 ：
2019-05-21
申请日 ：
2019-01-10
授权号 ：
CN109777830B
授权日 ：
2022-05-20
发明人 ：
王永明王贝
申请人 ：
复旦大学
申请人地址 ：
上海市杨浦区邯郸路220号
代理机构 ：
上海正旦专利代理有限公司
代理人 ：
陆飞
优先权 ：
CN201910022784.0
主分类号 ：
C12N15/85
IPC分类号 ：
C12N15/85 C12N15/90
相关图片
IPC结构图谱
C
C部——化学；冶金
C12
生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程
C12N
微生物或酶；其组合物；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基。
C12N15/00
突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体或其分离、制备或纯化；所使用的宿主
C12N15/09
DNA重组技术
C12N15/63
使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节
C12N15/79
专门适用于真核细胞宿主的载体或表达系统
C12N15/85
用于动物细胞
法律状态
2022-05-20 ：
授权
2019-06-14 ：
实质审查的生效
IPC(主分类) : C12N 15/85
申请日 : 20190110
申请日 : 20190110
2019-05-21 ：
公开
注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
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1、
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