本发明公开了一种分子印迹荧光光纤传感器及其构建方法、荧光检测方法，所述传感器包括激光光源、Y型光纤、石英光纤、法兰适配器和光纤光谱仪，激光光源、Y型光纤和光纤光谱仪依次相连，石英光纤修饰含有分子印迹微球的凝胶膜，所述Y型光纤与石英光纤之间通过法兰适配器相连接；激光光源发射出的激光通过Y型光纤传递到石英光纤上的凝胶膜，凝胶膜的荧光信号反射回Y型光纤，由Y型光纤传递到光纤光谱仪。本发明的传感器为可拆卸式的传感器，使得光纤探头可以替换，以便在现场分别进行多目标的快速检测，能够运用于环境水体中抗生素的现场快速监测，并且在使用结束后可以轻松破坏光纤探头修饰的传感膜，光纤探头得以回收，减少不必要的资源浪费。