本发明涉及一种总蛋白检测试剂及其制备方法，所述检测试剂中创造性地添加了没食子酰葡萄糖，其与硫酸铜和总蛋白存在强烈的结合力，可以大幅提升铜离子对总蛋白的络合作用，进而提高检测精度，同时还能有效降低铜离子的使用量；另外，本发明所述检测试剂的储存稳定性也明显提升。本发明提供的制备方法优先将没食子酰葡萄糖与非离子表面活性剂混合，使两者分子链充分缠绕后，再与硫酸铜、酒石酸钾钠和部分水混合，没食子酰葡萄糖与铜离子产生络合，这样得到的络合产物既可溶于水，避免了产生氢氧化铜沉淀，又能极大增加络合物在水中的相容性，通过所述制备方法得到的检测试剂中各组分在体系中均能稳定存在，提高了其长时间使用的可靠性。