本发明公开了一种触珠蛋白、血红蛋白、转铁蛋白共线检测试纸条及其制备方法和检测卡、试剂盒。该试纸条的检测线上包被有混和抗体；混和抗体包括第一抗人触珠蛋白单克隆抗体、第一抗人血红蛋白单克隆抗体和第一抗人转铁蛋白单克隆抗体；质控线上包被有质控抗体；金标垫上包被有胶体金标记的抗体；胶体金标记的抗体包括胶体金标记的第二抗人触珠蛋白单克隆抗体、胶体金标记的第二抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记的第二抗人转铁蛋白单克隆抗体；混和抗体与胶体金标记的抗体分别结合对应检测蛋白的不同抗原表位；胶体金标记的抗体还能够与质控抗体结合。本发明具有极高的敏感性，可检测4ng/mL的触珠蛋白，且兼顾特异性。