本发明公开了一种真菌毒素联合检测用试纸条、制备方法及其应用，包括支撑板、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和样品垫，在支撑板上方依次设置样品垫、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜和吸水垫；硝酸纤维素膜上设置有呕吐霉素、玉米赤酶烯酮毒素、黄曲霉B1、伏马毒素、T2毒素、赭曲毒素检测线和质控线；玻璃硝酸纤维素膜包含有量子点标记的呕吐霉素抗体、玉米赤酶烯酮毒素抗体、黄曲霉B1抗体、伏马毒素抗体、赭曲毒素抗体、T2毒素抗体和鸡IgY。作为检测探针，利用竞争法原理结合量子点的荧光特性实现了采用荧光免疫层析的方法，同时对呕吐霉素、玉米赤酶烯酮毒素、黄曲霉B1、伏马毒素、T2毒素、赭曲毒素进行快速、特异、简便、灵敏的联合检测。