本发明公开了一种性激素功能联合检测用试纸条、制备方法及其应用，该试纸条包括支撑板、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和样品垫，其中，支撑板，位于最底部，在支撑板上方依次设置样品垫、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜和吸水垫；硝酸纤维素膜上设置有FSH、LH、PRL、E2、T、P检测线和质控线；玻璃硝酸纤维素膜包含有量子点标记的FSH抗体、量子点标记的LH抗体、量子点标记的PRL抗体、量子点标记的E2抗体、量子点标记的P抗体、量子点标记的T抗体和量子点标记的鸡IgY。作为检测探针，利用竞争法和双抗体夹心法原理结合量子点的荧光特性实现了采用荧光免疫层析的方法，同时对FSH、LH、PRL、E2、T、P进行快速、特异、简便、灵敏的联合检测。