本发明公开了一种下消化道功能联合检测用试纸条、制备方法及其应用，该试纸条包括支撑板、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜、吸水垫和样品垫，其中，所述支撑板为长条结构，位于最底部，在支撑板上方依次设置样品垫、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜和吸水垫；硝酸纤维素膜上设置有FOB检测线、TF检测线、CAL检测线和质控线；所述玻璃硝酸纤维素膜包含有量子点标记的FOB抗体、TF抗体、CAL抗体和鸡IgY。本方案中以羧甲基纤维素钠系统进行量子点标记的FOB抗体、TF抗体、CAL抗体和鸡IgY混合物包被在玻璃纤维素膜上，作为检测探针，利用双抗体夹心法原理结合量子点的荧光特性实现了采用荧光免疫层析的方法，同时对下消化道功能进行快速、特异、简便、灵敏的联合检测。