本发明涉及光学超分辨显微成像技术，为提出基于结构光照明方法，减少重建所需的图像数量，降低复杂程度，提高重建速率，本发明，基于结构光照明的超分辨重构方法，利用空间光调制器SLM生成结构光，调制物面待测样本，并用CCD相机首次采集图像，通过空间光调制器生成相移为π的结构光，调制后二次采集图像，通过首次采集图像和二次采集图像相加获得宽场图像，并且利用宽场图像的频谱以及对该频谱进行维纳滤波生成的频谱，分离出二次采集图像中的高频信息，进行滤波和频谱移动操作，将高频移回原位置，并且通过广义维纳滤波对频谱进行加权平均，获取超分辨率的频谱，最后通过傅里叶逆变换获得超分辨图像。本发明主要应用于显微成像场合。