本实用新型公开了一种脉动臭氧灭菌柜，包括柜体、柜壁、消毒室、紫外线灯、真空泵机、高温蒸汽泵、臭氧生成装置、阀门、蒸汽含量测定器、臭氧含量测定器，气压测定器，柜体包含柜壁和消毒室。本实用新型提供结构合理，通过先对消毒室内的气压用真空泵机排空，再通入高温蒸汽泵生产的高温蒸汽，以及臭氧生产装置生产的臭氧进行高压蒸汽臭氧环境灭菌，有效杀灭细菌组织，由消毒室内的蒸汽含量测定器、臭氧含量测定器，气压测定器来检测环境，实时控制各机构运行，一段时间后，用高温蒸汽泵排空消毒室内的气体，继续以上操作，多次杀毒灭菌，达到最佳效果，多中灭菌方式同时进行灭菌，实时监控，提升效率。