本发明提供一种仿生人工肝组织及其制备方法与应用。本发明提供的仿生人工肝组织含有接近人体天然组织的极高的细胞密度，肝细胞呈现致密排布的特征更，肝组织功能良好。该人工肝组织具有成熟肝组织具有的白蛋白分泌、药物代谢、氮代谢和尿素合成等功能，表达成熟肝细胞的标志性蛋白标记物。本发明提供的构建方法工艺稳定，不仅可以使细胞快速增殖，获得与天然组织类似的极高的细胞密度，且获得的肝组织功能良好。本发明提供的构建方法可根据需要定制化设计、批量化生产。本发明的仿生人工肝组织可用于药物临床前检测、再生医学和体内移植、生物人工肝和肝功能代偿、肝脏疾病研究与治疗、药物测试与新药开发等领域。