本发明提供含有胆管和肝脏组织的人工肝结构体及其制备方法与应用。本发明的人工结构体含有肝实质细胞和胆管上皮细胞等多种细胞。肝细胞呈肝板样或团簇形态，胆管上皮细胞呈胆管样三维脉管网络形态。该人工肝结构体具有成熟肝组织的白蛋白分泌功能和氮代谢功能，表达成熟肝细胞的标志性蛋白标记物。该人工肝结构体还具有胆管上皮细胞连接形成的胆管网络结构，表达胆管上皮细胞标志物。本发明人工结构体的制备方法，可采用多种来源的细胞，根据需要定制化设计和批量化生产。本发明的人工肝结构体是一种具有广泛用途的肝脏模型，用于药物临床前检测、环境监测、毒理检测、组织工程、再生医学、新药研发、研究肝组织发育、研究疾病发生和发展等领域。