本发明提供一种双孢蘑菇液体菌种还原菌种及其栽培方法，属于食用菌液体菌种生产应用技术领域，包括以下方法：(1)母种的制备；(2)液体菌种的制备；(3)菌丝体处理及接种栽培料；本发明通过运用双孢蘑菇液体菌种纯菌丝体栽培，可将固体菌种50天左右的传代周期缩短为12天，减少了菌种的退化可能；通过纯菌丝体栽培，使得菌种的质量和体积变小，大幅减少了运输成本；后期将菌丝体打碎，用无菌水缓冲液稀释后接种，形成的菌丝球大小均一，菌丝球个数多，且萌发点多、发菌快、菌丝生长一致性高；且纯菌丝体保存于4℃冰箱内可存放6d以上，使其菌种的新鲜程度加强，与此同时，纯菌丝体菌种体积小，更便于运输，减少运输成本。