本发明公开了一种破壁剂组合物及其制备方法和在卵囊的应用，本发明破壁剂组合物组份包括有乙醇、溶菌酶、聚乙二醇、柠檬酸钾、果糖、麦芽糖、氯胺T、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、标准PBS缓冲液和注射用水，本发明破壁剂组合物中的乙醇、溶菌酶、聚乙二醇和柠檬酸钾等有效成份能与卵囊壁结构中的角质蛋白、糖蛋白、磷脂等主要成份相互作用并破坏其致密排列的刚性结构，使之形成允许冷冻保存材料通过的孔道结构，实现仅在轻度破坏卵囊壁结构的基础上增加卵囊渗透性，从而增强卵囊内玻璃化能力和抑制结冰能力，减少冰晶损害，延长低温保存时间，有效扩展了冷冻保存方案在含有卵囊的生物的领域的可应用性。