本实用新型公开了一种移动式在线高压灭菌装置，包括移动装置、设置于移动装置上的高压灭菌装置、以及设置于移动装置及高压灭菌装置之间的连接装置；高压灭菌装置包括第一液体隔离阀、第二液体隔离阀、第一蒸汽隔离阀、第二蒸汽隔离阀、疏水阀、输液管、第一蒸汽管、第二蒸汽管和排液管；输液管设置于第一液体隔离阀与第二液体隔离阀之间；第一蒸汽管的一端与第一液体隔离阀连接；第一蒸汽管设置第一蒸汽隔离阀；第二蒸汽管的一端与第二液体隔离阀连接，另一端与疏水阀连接；第二蒸汽管设置第二蒸汽隔离阀；疏水阀与排液管连接。本实用新型降低了无菌操作过程中对环境及操作人员的要求，可在非洁净区进行无菌连接操作，且可移动，灵活度高。